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GoldStar Best DNA Polymerase說明書
點擊次數(shù):1297 更新時間:2021-10-12

GoldStar Best DNA Polymerase說明書

                                                                

(5×GoldStar Best PCR Buffer With Mg  )2+

目錄號:K0654

 

保存條件:-20℃保存。

 

組分說明

 

  Cat. No.                                                    k0654        k0654A     k0654C

  Kit Size                                                     250 U        500 U       6×500 U

  GoldStar Best DNA Polymerase, 5 U/μl      50 μl       100 μl     6×100 μl

  5×GoldStar Best PCR Buffer                    1 ml         2×1 ml     3×5 ml

             注意:本產(chǎn)品的5×GoldStar Best PCR  Buffer中含有7.5mM鎂離子。

 

產(chǎn)品簡介

 

  該產(chǎn)品是經(jīng)過特殊處理的熱啟動高保真聚合酶。該聚合酶具有  5-3DNA聚合酶活

性,5-3′核酸外切酶活性和3-5′核酸外切酶活性,在普通PCR條件下,與GoldStar Taq

DNA Polymerase相比,具有擴(kuò)增效率高、錯配率低的優(yōu)良性能。化學(xué)修飾使該酶在常

溫下沒有聚合酶活性,有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚

體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增,酶的激活須在 95℃下孵育10分鐘,該條件可以整合入已有

PCR熱循環(huán)程序。優(yōu)化的緩沖體系使酶的作用發(fā)揮最大功效,實現(xiàn)對目的片段的高

保真、高特異性、高擴(kuò)增效率、高靈敏度擴(kuò)增。使用本制品擴(kuò)增得到的   PCR產(chǎn)物的3

端附有一個A”堿基,因此可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品應(yīng)用于常規(guī)的PCR、RT-PCR

多重PCR,特別適用于對特異性、保真性和擴(kuò)增效率均有較高要求的PCR

 

活性定義

 

  用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內(nèi),將10nmol

氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

質(zhì)量控制

 

  經(jīng)過多次柱純化, SDS-PAGE檢測其純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;

PCR方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因;室溫存放一

個月,無明顯活性改變。

 

                本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

 

                                                      

  使用方法

 

    以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的

    片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

 

    1. PCR反應(yīng)體系

 

試劑                                     50 μl反應(yīng)體系      終濃度

5×GoldStar Best Taq PCR Buffer                                10 μl                 1×

dNTP Mix,2.5 mM each                                         4 μl             200 μM each

Forward Primer10 μM                                        2 μl                   0.4 μM

Reverse Primer,10 μM                                         2 μl                   0.4 μM

Template DNA                                                         <1 μg               <1 μg/reaction

GoldStar Best Taq DNA Polymerase,             5 U/μl               0.5 μl

RNase-Free Water                           up to                 50 μl

 

       注意:1)引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提

       高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

       2)鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考。本產(chǎn)品的5×GoldStar Best Taq PCR

       Buffer中已含有7.5 mM鎂離子,可根據(jù)不同引物對和模板調(diào)節(jié)鎂離子濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

 

    2. PCR反應(yīng)條件

 

步驟                 溫度              時間

預(yù)變性                95℃            10 min

變性                  94℃            30 s

退火                 55-65℃          30 s     30-40個循環(huán)

延伸                  72℃            60 s

終延伸                72℃            5 min

 

       注意:1)一般實驗中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm5℃,無法得到理想的擴(kuò)增效率時,適當(dāng)降低退火溫度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時,提高退火溫度,由此優(yōu)化反應(yīng)條件。

       2)延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定,本產(chǎn)品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的擴(kuò)增效率為1 kb/min。

       3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,錯配機(jī)率會增加,非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

       4)本產(chǎn)品須在預(yù)變性95℃,10 min條件下實現(xiàn)酶的活化。

 

    3.結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取5  µl反應(yīng)產(chǎn)物,加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

 

實驗代做服務(wù):

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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